Prowadzący:

• dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
  
• dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny

Umiejętności jakie muszą posiadać uczestnicy warsztatów przed przystąpieniem do zajęć:

• elementarne zasady pracy w laboratorium (praca jałowa, obsługa pipet automatycznych)
• przydatna będzie znajomość podstaw PCR
  
• z warsztatów skorzystają również osoby, które zetknęły się już z technologią Real-time PCR (wartością będzie możliwość konsultacji trudniejszych przypadków z doświadczonymi użytkownikami różnych platform sprzętowych, praktykami w dziedzinie molekularnych technik diagnostycznych)

Umiejętności jakie nabędą uczestnicy warsztatów:

• dobór i zakup sprzętu do prowadzenia reakcji Real-time PCR
  
• izolacja kwasów nukleinowych z prób klinicznych na potrzeby diagnostyki opartej o Real-time PCR
  
• przeprowadzanie reakcji i rozwiązywanie problemów technicznych związanych z obsługą sprzętu
  
• analiza wyników i ich przygotowanie na potrzeby odbiorców (lekarzy, pacjentów etc.)
• rozpoznanie kontekstu klinicznego wykonywanych analiz i umiejętność doradzenia w zakresie doboru materiału do badań oraz oceny jakościowej i ilościowej wyników

Zajęcia praktyczne oparte będą o następujące reakcje, znajdujące zastosowanie w molekularnej diagnostyce medycznej:

• ilościowe badanie obecności wirusa CMV z użyciem fluorochromu SYBR Green
  
• ilościowe badanie obecności wirusa EBV z wykorzystaniem sond LightCycler oraz analizy krzywych topnienia produktów reakcji PCR
  
• zastosowanie multiplex qPCR do wykrywania obecności mutacji w genie K-RAS (diagnostyka molekularna w terapii celowanej raka jelita grubego)

ZAPRASZAMY:

diagnostów laboratoryjnych, biologów molekularnych i biotechnologów, pracowników stacji epidemiologicznych i stacji krwiodawstwa.

PROGRAM

DZIEŃ 1 15 czerwca 2009

10.20 Rozpoczęcie warsztatów

10.30 Wykład:

Podstawy techniki Real-time PCR

• podstawowe różnice między klasycznym PCR, Real-Time PCR a ilościowym PCR (qPCR),
• terminologia stosowana do opisu technik PCR w czasie rzeczywistym
• rodzaje sond i metod detekcji kwasów nukleinowych stosowanych w urządzeniach real-time PCR (SYBR Green, TaqMan, Molecular Beacons, Scorpions etc.)
• przegląd głównych grup zastosowań (proste pomiary ilości DNA, mierzenie poziomu ekspresji genów, wykrywanie mutacji i polimorfizmów etc.)
• ograniczenia metody Real-time PCR

dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu 11.15 Przedstawienie planu zajęć praktycznych (przekazanie protokołów i omówienie ćwiczeń)

11.30 Zajęcia praktyczne:

Przygotowanie matrycy do reakcji PCR, czyli izolacja DNA z próbek klinicznych 13.15 Przerwa na obiad

14.00 Zajęcia praktyczne:

Zapoznanie się z urządzeniem do prowadzenia reakcji PCR z możliwością pomiaru w czasie rzeczywistym

• zasada działania
• aplikacje
• software

14.30 Przygotowanie i przeprowadzenie reakcji: Ilościowe badanie obecności wirusa CMV z użyciem fluorochromu SYBR Green

15.45 Przerwa na kawę

16.15 Wykład: Zastosowania techniki Real-Time PCR w diagnostyce medycznej:

• Przekazywanie próbek od pacjenta do laboratorium (specyfika przechowywania i transportu materiału przeznaczonego do izolacji DNA) - próbki śliny, krwi, zastosowanie kart typu FTA etc.
• zakres czułości (uwagi praktyczne w kontekście badań diagnostycznych)
• przegląd testów opartych o Real-time PCR uwzględnionych w protokołach leczenia przyjętych w Polsce

dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny 17.00

Analiza, omówienie wyników oraz sformułowanie diagnozy z reakcji: Ilościowe badanie obecności wirusa CMV z użyciem fluorochromu SYBR Green

17.30 Zakończenie dnia


DZIEŃ 2 16 czerwca 2009

9.00 Rozpoczęcie warsztatów

9.10 Przygotowanie i przeprowadzenie reakcji:

Ilościowe badanie obecności wirusa EBV z wykorzystaniem sond LightCycler oraz analizy krzywych topnienia produktów reakcji PCR 10.10 Wykład: Praktyczne rady dotyczące zakupu i eksploatacji urządzeń Real-time PCR (cz. I)

• funkcje podstawowe
• funkcje zaawansowane
• certyfikaty

dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu 10.40 Wykład: Praktyczne rady dotyczące zakupu i eksploatacji urządzeń Real-time PCR (cz. II)

• koszty eksploatacji
• odczynniki i gotowe zestawy
• startery, czy warto projektować własne?
• kontrola jakości (kontrole dostarczane przez producentów zestawów oraz firmy zewnętrzne)

dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny 11.10 Analiza, omówienie wyników oraz sformułowanie diagnozy z reakcji:

Ilościowe badanie obecności wirusa EBV z wykorzystaniem sond LightCycler oraz analizy krzywych topnienia produktów reakcji PCR 11.40 Przerwa na kawę

12.10 Przygotowanie i przeprowadzenie reakcji:

Zastosowanie multiplex qPCR do wykrywania obecności mutacji w genie K-RAS (diagnostyka molekularna w terapii celowanej raka jelita grubego) 13.10 Wykład i dyskusja:

Rozwiązywanie problemów interpretacji i opracowania wyników na potrzeby lekarzy klinicystów oraz badań epidemiologicznych dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny 13.50 Przerwa na obiad

14.30 Analiza, omówienie wyników oraz sformułowanie diagnozy z reakcji: Zastosowanie multiplex qPCR do wykrywania obecności mutacji w genie K-RAS (diagnostyka molekularna w terapii celowanej raka jelita grubego)

15.00 Sesja "TROUBLESHOOTING", czyli wspólne rozwiązywanie problemów technicznych

• omówienie typowych problemów
• omówienie przypadków przedstawionych przez uczestników spotkania

dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu 15.45 Zakończenie dnia

www.cemed.pl

---

wstecz Podziel się ze znajomymi