Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X

Naukowy styl życia

Nauka i biznes

Strona główna Informacje

Transkrypcja przebiega inaczej niż sądzono

POLIMERAZA RNA II to enzym, który podczas procesu transkrypcji przepisuje DNA na RNA. Enzym ten transkrybuje geny do pre-mRNA, syntetyzuje również snRNA i małe jąderkowe RNA. Ostatnie badania dotyczące transkrypcji z udziałem POLIMERAZY RNA II wykazały, że mechanizm terminacji elongacji, który do tej pory wyjaśniany był udziałem egzonukleaz bądź zmianą konformacji enzymu, w rzeczywistości odbywa się w całkiem inny sposób.

Proces regulacji ekspresji genów wydaje się być jeszcze bardziej skomplikowany niż dotąd sądzono. Dzięki badaniom nad organizmami modelowymi oraz rzadkimi typami białaczek uczeni doszli do wniosku, że proces transkrypcji regulowany jest przez grupy czynników, które charakterystyczne są dla określonych grup genów. Eksperymentowanie z tymi czynnikami prowadzi do zmian ekspresji powiązanych ze soba dzięki temu genów. Już wkrótce wyniki tych badań mogą postawić na głowie całą biotechnologię molekularną.

Polimerazy DNA są enzymami katalizującymi syntezę DNA. W komórce pełnią istotną rolę np. podczas replikacji. Substratami niezbędnymi do działania polimeraz są nukleotydy (w PCR: dNTP). Synteza DNA odbywa się na matrycy, którą jest jednoniciowa cząsteczka DNA. Synteza ta odbywa się od krótkiego, komplementarnego odcinka DNA zwanego starterem (określany też jako primer). 


DNA POLIMERAZA I - polimeraza Kornberga

Enzym ten otrzymano z E.coli. Jest to pojedynczy polipeptyd o masie cząsteczkowej 109 kD

Aktywności Polimerazy Kornberga:
- synteza DNA od końca 5’ do 3’ - wymaga jednoniciowej matrycy oraz startera DNA lub RNA
- egzonukleaza 3’-5’ – degraduje jednoniciowy lub dwuniciowy DNA
- egzonukleaza 5’-3’- degraduje dwuniciowy DNA lub hybrydy DNA-RNA

Warunki reakcji:
- pH – około 7,4
- niezbędna obecność jonów magnezowych
- 10x stężony bufor o składzie: Tris-HCl, MgCl2, DTT, BSA


DNA Polimeraza I - fragment Klenowa

Enzym ten uzyskuje się na dwa sposoby: poprzez proteolizę polimerazy Kornberga subtilizyną lub z rekombinantów E.coli. Jest to pojedynczy polipeptyd o masie cząsteczkowej 75 kD

Aktywności DNA Polimerazy I (fragment Klenowa):
- synteza DNA od końca 5’ do 3’ - wymaga jednoniciowej matrycy oraz primera DNA lub RNA
- egzonukleaza 3’-5’ – degraduje jednoniciowy lub dwuniciowy DNA
- brak aktywności egzonukleazy 5’-3’

Warunki reakcji:
- pH – około 7,4
- niezbędna obecność jonów magnezowych
- reakcja w temperaturze pokojowej do 37 stopni C
- 10x stężony bufor o składzie: Tris-HCl, MgCl2, DTT, BSA

DNA Polimeraza I (fragment Klenowa) charakteryzuje się tym, że bardzo często dodaje jeden lub więcej nukleotydów do końca 3’.


Polimeraza Taq

Enzym ten uzyskano z bakterii Thermus aquaticus lub rekombinantów E.coli. Charakterystyczną właściwością tego enzymu jest termostabilnośc w zakresie temperatur 37-94 stopnie C.

Aktywności Polimerazy Taq:
- synteza DNA od końca 5’ do 3’ - wymaga jednoniciowej matrycy oraz startera DNA lub RNA
- egzonukleaza 3’-5’ – degraduje jednoniciowy lub dwuniciowy DNA
- brak aktywności egzonukleazy 5’-3’

Warunki reakcji:
- pH – około 7,4
- niezbędna obecność jonów magnezowych
- optimum działania przy 80 stopniach C

Polimeraza Taq dodaje jedną adeninę do końca 3’. Charakterystyczne jest również to, że enzym ten popełnia dużo błędów.


Polimeraza faga T4

Enzym ten uzyskano z bakterii E. coli zakażonych fagiem T4 lub z rekombinantów E. coli. Jest to pojedynczy polipeptyd o masie cząsteczkowej 114 kD

Aktywności Polimerazy faga T4:
- synteza DNA od końca 5’ do 3’ - wymaga jednoniciowej matrycy oraz startera DNA lub RNA
- egzonukleaza 3’-5’ – degraduje jednoniciowy lub dwuniciowy DNA, większa aktywnośc dla nici pojedynczej niż podwójnej
- brak aktywności egzonukleazy 5’-3’

Warunki reakcji:
- pH – około 8,0-9,0
- niezbędna obecność jonów magnezowych (optymalnie 6 mM)
- optimum działania przy 37 stopniach C
- 10x stężony bufor o składzie: Tris-octan, octan magnezu, DTT, octan potasu, BSA.


Polimeraza faga T7

Enzym ten uzyskano z bakterii E. coli zakażonych fagiem T7. Jest to dimer złożony z produktu genu 5 faga T7 o masie84 kD (aktywnośc polimerazy i egzonukleazy) i trioredoksyny E. coli o masie12 kD (wiązanie z matrycą DNA).

Aktywności Polimerazy faga T4:
- synteza DNA od końca 5’ do 3’ - wymaga jednoniciowej matrycy oraz startera DNA lub RNA
- egzonukleaza 3’-5’ – degraduje jednoniciowy lub dwuniciowy DNA, aktywnośc 1000x większa niż DNA Polimeraza I (fragment Klenowa)!
- brak aktywności egzonukleazy 5’-3’

Warunki reakcji:
- pH – około 7,5
- niezbędna obecność jonów magnezowych
- optimum działania przy 37 stopniach C
- 10x stężony bufor o składzie: Tris-HCl, MgCl2, DTT


Fot: http://www.e-biotechnologia.pl/Źródło: http://www.e-biotechnologia.pl/, Transcriptional Elongation Control Takes On New Dimensions as Researchers Find Gene Class-Specific Elongation Factors


Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje




Pływanie zmniejsza ryzyko zgonu
02-12-2016

Pływanie zmniejsza ryzyko zgonu

Pływanie, uprawianie aerobiku i sportów rakietowych związane jest z mniejszym prawdopodobieństwem zgonu z różnych przyczyn.

znajdz nas na fcb
Informacje dnia: Stypendia naukowe dla wybitnych młodych naukowców Nanomateriały pomagają w oczyszczaniu wody Pływanie zmniejsza ryzyko zgonu Męska płodność na poziomie molekularnym 16 mln euro dla naukowców zajmujących się żywnością Innowacyjne cewniki medyczne Stypendia naukowe dla wybitnych młodych naukowców Nanomateriały pomagają w oczyszczaniu wody Pływanie zmniejsza ryzyko zgonu Męska płodność na poziomie molekularnym 16 mln euro dla naukowców zajmujących się żywnością Innowacyjne cewniki medyczne Stypendia naukowe dla wybitnych młodych naukowców Nanomateriały pomagają w oczyszczaniu wody Pływanie zmniejsza ryzyko zgonu Męska płodność na poziomie molekularnym 16 mln euro dla naukowców zajmujących się żywnością Innowacyjne cewniki medyczne

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Warszawskie Stowarzyszenie Biotechnologiczne (WSB) „Symbioza” Obywatele Nauki NeuroSkoki Biomantis Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA BIOOPEN 2016 QDAY Mlodym Okiem Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Geodezja „Pomiędzy naukami – zjazd fizyków i chemików” WIMC WARSZAWA 2016 Konferencja Biomedyczna Projektor Jagielloński Instytut Lotnictwa EuroLab