Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Reklama1
Strona główna Artykuły

Oznaczanie ilościowe białek - porównanie metod

Streszczenie

Różnorodność metod spektrofotometrycznych i wiedza na ich temat pozwala badaczowi dobrać odpowiednią metodę do pomiaru białek uwzględniając specyficzność próbki i wyeliminować czynniki zakłócające pomiar. Artykuł przedstawia najpopularniejszych siedem metod identyfikacji białek.

Wprowadzenie

Znanych jest wiele metod badania obecności i ilości białek w próbkach, większość z nich opiera się na spektrofotometrii, wykorzystującej specyficzne własności białek. Metody różnią się między sobą czułością, zakresem detekcji, a wpływ na wynik ma wiele substancji występujących dodatkowo w badanych próbkach. Techniki wykonania poszczególnych metod są proste, mimo to badacze uzyskują nie poprawny wyniki stosując jedną (często „ulubioną”) metodę do wszystkich próbek.

Oznaczanie białka metodą pomiaru absorbancji w ultrafiolecie [1]

 Metoda ta polega na wykorzystaniu pochłaniania światła przy długości fali λ=280nm przez aminokwasy aromatyczne np. tyrozyny i tryptofanu, które występują w białkach. Doświadczenia dowodzą, iż liczba aminokwasów odpowiadająca za absorbancję przy tej długości fali jest zbliżona dla wszystkich białek enzymatycznych. Substancjami zakłócającymi są kwasy nukleinowe, których maksimum absorpcji jest zbliżone λ=260nm. W próbkach zawierających obie substancje stosuje się metodę Warburga i Christiana, gdzie pomiary wykonuje się pomiary przy obu długościach a stosunek obu wartości absorbancji określa się literą F, która jest mnożnikiem rzeczywistej wartości absorbancji przy 280nm (Równanie 1, 2).

Cały artykuł do pobrania poniżej:

Oznaczanie ilościowe białek - porównanie metod


Autor: Karolina Wójciuk

Literatura:


[1] Colowick S.P., Kaplan O. 1957. Methods In Enzymology. Vol.8: 451-454. Acad. Press, New York&London

[2] Warburg O., Christian W. 1941. Biochem. 310: 384

[3] Kalckar H.M., Shafran M. 1947. J. Biol. Chem. 167: 465-275

[4] Gniot-Szulżycka J., Leźnicki A., Komoszyński M., Wojczuk B. 2005. Białka. Materiały do ćwiczeń z biochemii – metody ilościowego oznaczania rozdziału i oczyszczania.

[5] Bradford M.M. 1976.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 7;72:248-54

[6] Wójciuk K. Ilościowe oznaczanie białka, czyli wszystko co powinniśmy wiedzieć o metodzie Bradford. 2013. Labro Technologie

[7]  Freeman H.C., Smith J.E.W.L., Taylor J.C.1961. Crystallographic studies of the biuret reaction. I. Potassium bis-biuret cuprate(II) tetrahydrate, K2[Cu(NHCONHCONH)2]·4H2O. Acta Cryst. 14, s. 407-418

[8]Lowry O.H.i wsp. 1951. Protein measurements with the Folin Phenol Reagent, J.Biol.Chem., 193: 267-275

[9] Bensadoun A., Weinstein D. 1976. Assay of proteins In the presence of interfering materials. Anal. Biochem. 70:241-250






Tagi: analiza jakościowa, analiza ilościowa, metody spektroskopowe, białko, pomiar w ultrafiolecie wg Whitakera i Granuma, metoda Bradford, metoda Lowry, metoda Bensadouna i Weinsteina, metoda biuretowa, oznaczanie BCA
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



znajdz nas na fcb
Informacje dnia: Potwierdzono - składniki diety mogą powodować migreny Biomarkery prognostyczne postępów cukrzycy Białe wino może zwiększać ryzyko czerniaka Dawne antybiotyki we współczesnej terapii Garść orzechów chroni przed wieloma chorobami Czynnościowa rola białek Potwierdzono - składniki diety mogą powodować migreny Biomarkery prognostyczne postępów cukrzycy Białe wino może zwiększać ryzyko czerniaka Dawne antybiotyki we współczesnej terapii Garść orzechów chroni przed wieloma chorobami Czynnościowa rola białek Potwierdzono - składniki diety mogą powodować migreny Biomarkery prognostyczne postępów cukrzycy Białe wino może zwiększać ryzyko czerniaka Dawne antybiotyki we współczesnej terapii Garść orzechów chroni przed wieloma chorobami Czynnościowa rola białek

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Warszawskie Stowarzyszenie Biotechnologiczne (WSB) „Symbioza” Obywatele Nauki NeuroSkoki Biomantis Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA BIOOPEN 2016 QDAY Mlodym Okiem Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Geodezja „Pomiędzy naukami – zjazd fizyków i chemików” WIMC WARSZAWA 2016 Konferencja Biomedyczna Projektor Jagielloński Instytut Lotnictwa EuroLab