Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Niespodzianka
Strona główna Artykuły
Dodatkowy na dole

Dodatkowy u góry

Oznaczanie ilościowe białek - porównanie metod

Streszczenie

Różnorodność metod spektrofotometrycznych i wiedza na ich temat pozwala badaczowi dobrać odpowiednią metodę do pomiaru białek uwzględniając specyficzność próbki i wyeliminować czynniki zakłócające pomiar. Artykuł przedstawia najpopularniejszych siedem metod identyfikacji białek.

Wprowadzenie

Znanych jest wiele metod badania obecności i ilości białek w próbkach, większość z nich opiera się na spektrofotometrii, wykorzystującej specyficzne własności białek. Metody różnią się między sobą czułością, zakresem detekcji, a wpływ na wynik ma wiele substancji występujących dodatkowo w badanych próbkach. Techniki wykonania poszczególnych metod są proste, mimo to badacze uzyskują nie poprawny wyniki stosując jedną (często „ulubioną”) metodę do wszystkich próbek.

Oznaczanie białka metodą pomiaru absorbancji w ultrafiolecie [1]

 Metoda ta polega na wykorzystaniu pochłaniania światła przy długości fali λ=280nm przez aminokwasy aromatyczne np. tyrozyny i tryptofanu, które występują w białkach. Doświadczenia dowodzą, iż liczba aminokwasów odpowiadająca za absorbancję przy tej długości fali jest zbliżona dla wszystkich białek enzymatycznych. Substancjami zakłócającymi są kwasy nukleinowe, których maksimum absorpcji jest zbliżone λ=260nm. W próbkach zawierających obie substancje stosuje się metodę Warburga i Christiana, gdzie pomiary wykonuje się pomiary przy obu długościach a stosunek obu wartości absorbancji określa się literą F, która jest mnożnikiem rzeczywistej wartości absorbancji przy 280nm (Równanie 1, 2).

Cały artykuł do pobrania poniżej:

Oznaczanie ilościowe białek - porównanie metod


Autor: Karolina Wójciuk

Literatura:


[1] Colowick S.P., Kaplan O. 1957. Methods In Enzymology. Vol.8: 451-454. Acad. Press, New York&London

[2] Warburg O., Christian W. 1941. Biochem. 310: 384

[3] Kalckar H.M., Shafran M. 1947. J. Biol. Chem. 167: 465-275

[4] Gniot-Szulżycka J., Leźnicki A., Komoszyński M., Wojczuk B. 2005. Białka. Materiały do ćwiczeń z biochemii – metody ilościowego oznaczania rozdziału i oczyszczania.

[5] Bradford M.M. 1976.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 7;72:248-54

[6] Wójciuk K. Ilościowe oznaczanie białka, czyli wszystko co powinniśmy wiedzieć o metodzie Bradford. 2013. Labro Technologie

[7]  Freeman H.C., Smith J.E.W.L., Taylor J.C.1961. Crystallographic studies of the biuret reaction. I. Potassium bis-biuret cuprate(II) tetrahydrate, K2[Cu(NHCONHCONH)2]·4H2O. Acta Cryst. 14, s. 407-418

[8]Lowry O.H.i wsp. 1951. Protein measurements with the Folin Phenol Reagent, J.Biol.Chem., 193: 267-275

[9] Bensadoun A., Weinstein D. 1976. Assay of proteins In the presence of interfering materials. Anal. Biochem. 70:241-250






Tagi: analiza jakościowa, analiza ilościowa, metody spektroskopowe, białko, pomiar w ultrafiolecie wg Whitakera i Granuma, metoda Bradford, metoda Lowry, metoda Bensadouna i Weinsteina, metoda biuretowa, oznaczanie BCA
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



Informacje dnia: Naukowe oblicze futbolu Polacy stworzyli prototyp drukarki 3D ze skanerem 3D Rower przyszłości W Polsce powstaje bioniczna nerka Białka iRhom2 kluczem do walki z chorobą Alzheimera Naukowcy odkryli nowe wirusy Naukowe oblicze futbolu Polacy stworzyli prototyp drukarki 3D ze skanerem 3D Rower przyszłości W Polsce powstaje bioniczna nerka Białka iRhom2 kluczem do walki z chorobą Alzheimera Naukowcy odkryli nowe wirusy Naukowe oblicze futbolu Polacy stworzyli prototyp drukarki 3D ze skanerem 3D Rower przyszłości W Polsce powstaje bioniczna nerka Białka iRhom2 kluczem do walki z chorobą Alzheimera Naukowcy odkryli nowe wirusy

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Job24 Obywatele Nauki NeuroSkoki Portal MaterialyInzynierskie.pl Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA Mlodym Okiem Polski Instytut Rozwoju Biznesu Analityka Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Geodezja Instytut Lotnictwa EuroLab

Szanowny Czytelniku!

 
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
 
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.

Kto będzie administratorem Twoich danych?

Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).

O jakich danych mówimy?

Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.

Dlaczego chcemy przetwarzać Twoje dane?

Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:

Komu możemy przekazać dane?

Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.

Jakie masz prawa w stosunku do Twoich danych?

Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.

Jakie są podstawy prawne przetwarzania Twoich danych?

Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.

Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
 
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
 

Newsletter

Zawsze aktualne informacje