Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Strona główna Artykuły

Oznaczanie ilościowe białek - porównanie metod

Streszczenie

Różnorodność metod spektrofotometrycznych i wiedza na ich temat pozwala badaczowi dobrać odpowiednią metodę do pomiaru białek uwzględniając specyficzność próbki i wyeliminować czynniki zakłócające pomiar. Artykuł przedstawia najpopularniejszych siedem metod identyfikacji białek.

Wprowadzenie

Znanych jest wiele metod badania obecności i ilości białek w próbkach, większość z nich opiera się na spektrofotometrii, wykorzystującej specyficzne własności białek. Metody różnią się między sobą czułością, zakresem detekcji, a wpływ na wynik ma wiele substancji występujących dodatkowo w badanych próbkach. Techniki wykonania poszczególnych metod są proste, mimo to badacze uzyskują nie poprawny wyniki stosując jedną (często „ulubioną”) metodę do wszystkich próbek.

Oznaczanie białka metodą pomiaru absorbancji w ultrafiolecie [1]

 Metoda ta polega na wykorzystaniu pochłaniania światła przy długości fali λ=280nm przez aminokwasy aromatyczne np. tyrozyny i tryptofanu, które występują w białkach. Doświadczenia dowodzą, iż liczba aminokwasów odpowiadająca za absorbancję przy tej długości fali jest zbliżona dla wszystkich białek enzymatycznych. Substancjami zakłócającymi są kwasy nukleinowe, których maksimum absorpcji jest zbliżone λ=260nm. W próbkach zawierających obie substancje stosuje się metodę Warburga i Christiana, gdzie pomiary wykonuje się pomiary przy obu długościach a stosunek obu wartości absorbancji określa się literą F, która jest mnożnikiem rzeczywistej wartości absorbancji przy 280nm (Równanie 1, 2).

Cały artykuł do pobrania poniżej:

Oznaczanie ilościowe białek - porównanie metod


Autor: Karolina Wójciuk

Literatura:


[1] Colowick S.P., Kaplan O. 1957. Methods In Enzymology. Vol.8: 451-454. Acad. Press, New York&London

[2] Warburg O., Christian W. 1941. Biochem. 310: 384

[3] Kalckar H.M., Shafran M. 1947. J. Biol. Chem. 167: 465-275

[4] Gniot-Szulżycka J., Leźnicki A., Komoszyński M., Wojczuk B. 2005. Białka. Materiały do ćwiczeń z biochemii – metody ilościowego oznaczania rozdziału i oczyszczania.

[5] Bradford M.M. 1976.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 7;72:248-54

[6] Wójciuk K. Ilościowe oznaczanie białka, czyli wszystko co powinniśmy wiedzieć o metodzie Bradford. 2013. Labro Technologie

[7]  Freeman H.C., Smith J.E.W.L., Taylor J.C.1961. Crystallographic studies of the biuret reaction. I. Potassium bis-biuret cuprate(II) tetrahydrate, K2[Cu(NHCONHCONH)2]·4H2O. Acta Cryst. 14, s. 407-418

[8]Lowry O.H.i wsp. 1951. Protein measurements with the Folin Phenol Reagent, J.Biol.Chem., 193: 267-275

[9] Bensadoun A., Weinstein D. 1976. Assay of proteins In the presence of interfering materials. Anal. Biochem. 70:241-250






Tagi: analiza jakościowa, analiza ilościowa, metody spektroskopowe, białko, pomiar w ultrafiolecie wg Whitakera i Granuma, metoda Bradford, metoda Lowry, metoda Bensadouna i Weinsteina, metoda biuretowa, oznaczanie BCA
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



Informacje dnia: 13. edycja konkursu Popularyzator Nauki Badania zapalenia kości na poziomie komórki NCBR inwestuje w systemy bezzałogowe Retrotranspozony genomu i choroby u ludzi Hormon długowieczności zwiększa możliwości mózgu Wykorzystanie nowych technologii 3D w kryminalistyce 13. edycja konkursu Popularyzator Nauki Badania zapalenia kości na poziomie komórki NCBR inwestuje w systemy bezzałogowe Retrotranspozony genomu i choroby u ludzi Hormon długowieczności zwiększa możliwości mózgu Wykorzystanie nowych technologii 3D w kryminalistyce 13. edycja konkursu Popularyzator Nauki Badania zapalenia kości na poziomie komórki NCBR inwestuje w systemy bezzałogowe Retrotranspozony genomu i choroby u ludzi Hormon długowieczności zwiększa możliwości mózgu Wykorzystanie nowych technologii 3D w kryminalistyce

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Obywatele Nauki NeuroSkoki Biomantis Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA BIOOPEN 2016 Mlodym Okiem Nanotechnologia Lodz Genomica SYMBIOZA 2017 Podkarpacka Konferencja Młodych Naukowców Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Geodezja „Pomiędzy naukami – zjazd fizyków i chemików” WIMC WARSZAWA 2016 Konferencja Biomedyczna Projektor Jagielloński Instytut Lotnictwa EuroLab