Wykorzystanie chemiluminescencji do oznaczania wolnych rodników powstających w płytkach krwi

Wykonanie:

Do kuwety chemiluminescencyjne dodać 1 ml zawiesiny płytek krwi (tj. płytki krwi otrzymane metodą wirowania osocza bogatopłytkowego, zawieszone w buforze Tyroda) oraz 20 µl 0,2 mM roztworu luminolu. Od razu rozpocząć pomiar powstających wolnych rodników w chemiluminometrze w czasie od 15 do 30 minut [2].

Reakcja chemiluminescencji zachodzi również w trakcie inkubacji płytek krwi i ich fragmentów z kwasem arachidonowym. Wielkość emisji światła jest bezpośrednio związana z liczbą płytek krwi znajdujących się w mieszaninie reakcyjnej. Reakcja chemiluminescencji płytek jest prawie całkowicie zależna od tlenu. Oprócz kwasu arachidonowego, również siedem innych wielonienasyconych kwasów tłuszczowych ma zdolność indukowania chemiluminescencji płytek krwi [7]. Przeprowadzone badania wykazały, że płytki krwi inkubowane w niskich stężeniach kwasu acetylosalicylowego lub płytki pobrane od pacjentów, którzy spożywali aspirynę, wykazują znaczne zmniejszenie chemiluminescencji podczas inkubacji z kwasem arachidonowym. Co więcej badania wykazały, że kwas salicylowy i kwas sulfosalicylowy nie mają działania hamującego na proces chemiluminescencji płytek [7].

Autor: Zuzanna Koperwas

Literatura:

[1]. Smorąg I., Baj Z., 2008. Niehemostatyczna rola płytek krwi. Uniwersytet Medyczny w Łodzi. http://www.diagnostykalaboratoryjna.eu/journal/DL_2008__2;_241-248.pdf

[2]. Kłyszejko-Stefanowicz L, 2003. Ćwiczenia z biochemii. Wydawnictwo Naukowe PWN, 2003, s. 671-691.

 [3]. Sikora J., Kostka B., 2005. Struktura i aktywacja płytek krwi oraz ich zastosowanie jako komórek modelowych. Postępy Biologii Komórki. Tom 32 2005 Nr 3 (561-569). http://www.pbkom.eu/sites/default/files/artykulydo2012/32_3_561.pdf

[4]. Badanie hemostazy: osoczowy układ krzepnięcia i zaburzenia dotyczące płytek krwi, Rozdz. 6, 93-110,http://edraurban.pl:8080/book-sample-file/diagnostyka-laboratoryjna-w-weterynarii/pdf/093_110_r06_veterinarylabmed.pdf

[5]. Assinger A., 2014. Platelets and infection – an emerging role of platelets in viral infection. Front. Immunol., 18 December 2014 | http://dx.doi.org/10.3389/fimmu.2014.00649

http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fimmu.2014.00649/full

[6]. Kubica J., Koziński M., Grześk G., 2009. Mechanizmy działania leków przeciwpłytkowych. Praca poglądowa. Folia Cardiologica Excerpta 2009, tom 4, nr 1, 10–17, Via Medica.
[7]. Mills E.L., Gerrard J.M., Filipovich D., White J.D., Quie P.G., 1978. The Chemiluminescence Response of Human Platelets. J Clin Invest. 1978 Mar; 61(3): 807–814. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC372596/

[8]. Łubkowska M., 2008. EKSPRESJA OSTEOPONTYNY I TROMBOSPONDYNY W NOWOTWORZE  JELITA GRUBEGO. http://www.statsoft.pl/Portals/0/Downloads/Ekspresja_osteopontyny.pdf

[9]. Wierzbowska A., Krawczyńska A., Wrzesień-Kuś A., Sobczak-Pluta A., Robak T., 2004. Trombospondyna-1 i jej znaczenie w biologii nowotworów układu krwiotwórczego. Acta Haematologica Polonica 2004, Nr 1 str. 15-26.

[10]. Jackson S.P., 2007. The growing complexity of platelet aggregation. Blood journal, June 15, 2007; Blood: 109 (12). http://www.bloodjournal.org/content/109/12/5087?sso-checked=true

[11]. http://www.pbkom.eu/pl/content/charakterystyka-p%C5%82ytkowych-receptor%C3%B3w-dla-adp

[12]. Wachowicz B., 1999. Receptory purynowe na płytkach krwi. FOLIA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA 14, 1999. ACTA UNIVERSITATIS LODZIENSIS. http://repozytorium.uni.lodz.pl:8080/xmlui/bitstream/handle/11089/14655/7_Folia%20Biochimica%20Et%20Biophysica_14_%201999.pdf?sequence=1&isAllowed=y

 

[13]. Olas B., Wachowicz B., 1997. Zmiany aktywacji płytek krwi wywołane działaniem leku antynowotworowego – cisplatyny. FOLIA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA 12, 1997. ACTA UNIVERSITATIS LODZIENSIS. http://dspace.uni.lodz.pl:8080/xmlui/bitstream/handle/11089/14490/53_Folia%20Biochimica%20Et%20Biophysica_12_%201997.pdf?sequence=1&isAllowed=y

[14].http://www.termedia.pl/Review-paper-Problems-of-contemporary-antiplatelet-treatment,35,14583,1,1.html

[15]. Syska K., Golański J., 2012. Laboratoryjne metody oceny działania klopidogrelu oraz innych leków przeciwpłytkowych blokujących receptor P2Y12. diagnostyka laboratoryjna

Journal of Laboratory Diagnostics 2012 • Volume 48 • Number 3 • 323-332. http://diagnostykalaboratoryjna.eu/journal/DL_3_2012._str_323-332.pdf

[16]. http://www.wbc.poznan.pl/Content/298623/index.pdf

[17]. Kardiolog,pl , Oporność na leki przeciwpłytkowe.

[18]. Postuła M., Kapłon-Cieślicka A., Rosiak M., Filipiak K.J., 2008. Nieprawidłowa odpowiedź na kwas acetylosalicylowy – definicje i zasady postępowania w świetle poznanych czynników ryzyka. Suplement Golba S.qxp 2008-10-07 12:27 Page 326. http://www.kardiologia-eksperymentalna.pl/pub_pliki/_plk21_1_Nieprawidowaodpowiednakwasnaacetylosalicylowy.pdf

 
[19]. Żytkiewicz M., Giełwanowska L., Wojtasińska E., Psuja P., Zawilska K., 2008. Oporność na kwas acetylosalicylowy u chorych po niedokrwiennym udarze mózgu. Pol Arch Med. Wewn. 2008, 118 (12): 727-733. http://pamw.pl/sites/default/files/zytkiewicz_pl.pdf