Laboratoria.net
|
Zamknij X
|
Mikromacierze DNA są techniką pozwalającą na jednoczesną analizę wielu zmian w genach, jak również pozwalają badać poziom ekspresji dużych grup genów. Mikromacierze definiowane są jako zbiór fragmentów DNA, które w uporządkowany sposób związane są z odpowiednio zastosowanym podłożem (płytką szklaną lub plastikową). W większości stosowanych mikromacierzy wykorzystywane są sondy oligonukleotydowe, które są komplementarne do badanych sekwencji [2].
W zależności od przeznaczenia, budowę, sposób otrzymywania, a także ilość sond na jednej płytce, wyodrębniono dwa oddzielne systemy macierzy DNA:
- macierze oparte na oligonukleotydach (tzw. mikromacierze oligonukleotydowe o wysokiej gęstości). Ze względu na sposób ich otrzymywania zwany Genechip, wprowadzono określenie chipy DNA.
W mikromacierzach oligonukleotydowych wykorzystywana jest plastikowa płytka. Bezpośrednio na płytce (in situ) przeprowadzana jest reakcja kontrolowanej syntezy oligonukleotydów o określonej sekwencji. Otrzymane w ten sposób oligonukleotydy zazwyczaj mają długość mniejszą niż 30 bp, zbudowane są z 15–25 nukleotydów, a ich rozmiar nie przekracza 10 μm. Plastikowa płytka o powierzchni 2 cm2, będąca nośnikiem macierzy może zmieścić około 300 tys. sond oligonukleotydowych [2], [5].
- mikromacierze wysokiej gęstości, gdzie na powierzchni płytki znajduje się od kilkaset tysięcy do prawie 2 milionów sond [2].
- mikromacierze cDNA – w technice ich otrzymywania wykorzystuje się biblioteki klonów DNA, które są automatycznie nanoszone na szkiełko macierzy. Mikromacierze otrzymywane są na zwykłym szkiełku podstawowym preparatu mikroskopowego, na którym specjalna mikrodrukarka nanosi seryjnie odpowiednie sondy cDNA. Długość zastosowanych sond waha się w granicach 0,5–2kb. Same sondy uzyskuje się w wyniku klonowania produktów reakcji odwrotnego PCR (ang. RT-PCR). Możliwe jest naniesienie ok. 25 tys. fragmentów cDNA (sond DNA) na powierzchnię jednego szkiełka mikroskopowego pokrytego poli-L-lizyną, do której przyłącza się sondy cDNA [5].
Tego typu mikromacierze zostały opracowane na Uniwersytecie Stanforda, gdzie ze względu na kilka zalet wzbudziły ogromne zainteresowanie. Technika mikromacierzy cDNA pozwoliła na badanie ekspresji genów nawet w przypadku, gdy nie była znana ich pełna sekwencja, a wymogiem przeprowadzenia reakcji było dysponowanie odpowiednimi klonami DNA namnożonymi w wyniku reakcji odwrotnej transkrypcji i reakcję łańcuchową polimerazy z mRNA izolowanego z danych komórek [6].
Ciekawą alternatywą dla mikromacierzy „statycznych”, które zawierają sondy immobilizowane na szkiełku, są tzw. mikromacierze przepływowe znane również jako dynamiczne (ang. bead arrays, microfluidic system, flow-through technology). W przypadku tych mikromacierzy poszczególne sondy DNA zakotwiczone są na pływających swobodnie w roztworze ziarnach. Ziarna najczęściej są kuleczkami silikonowymi lub polistyrenowymi o średnicy kilku mm (od 24-30 mm) [9], [13].
Firma Luminex, w celu odróżnienia od siebie poszczególnych ziaren (tj. nośników specyficznych sekwencji oligonukleotydowych) do techniki wprowadziła unikatową mieszaniną dwóch barwników fluorescencyjnych (np. czerwonego i pomarańczowego zestawionych w odpowiedniej proporcji), którymi zostały wysycone ziarna. Trzeci zastosowany barwnik tzw. reporter (np. koloru zielonego) służy do znakowania badanej próbki biologicznej. Identyfikacja ziaren odbywa się z wykorzystaniem cytometrii przepływowej, gdzie przeprowadzany jest pomiar emisji barwników klasyfikacyjnych. W trakcie analizy przyjmuje się, że intensywność sygnału pochodzącego od barwnika reporterowego jest proporcjonalna do ilości sekwencji docelowej związanej z sondą [9], [13].
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.
Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).
Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.
Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:
dopasować treści stron i ich tematykę, w tym tematykę ukazujących się tam materiałów do Twoich zainteresowań,
dokonywać pomiarów, które pozwalają nam udoskonalać nasze usługi i sprawić, że będą maksymalnie odpowiadać Twoim potrzebom,
pokazywać Ci reklamy dopasowane do Twoich potrzeb i zainteresowań.
Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.
Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.
Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.
Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
Recenzje