Laboratoria.net
|
Zamknij X
|
Barwienie proste drobnoustrojów
W barwieniu prostym wykorzystywany jest tylko jeden barwnik (np. błękit metylenowy lub fuksyna), którym traktuje się preparat przez ok. 1-2 minuty. Wśród metod barwienia znana jest metoda barwnikiem Giemsy, która pozwala na wybarwienie drobnoustrojów na różne kolory. I tak riketsje barwią się na czerwono, a krętki na fioletowo lub różowo. Barwnik Giemsy znalazł również zastosowanie w cytologii do barwienia do barwienia nukleoidu lub jąderka [2].
Barwienie złożone
W metodzie tej wykorzystywane jest kilka barwników według ściśle określonej kolejności (lub barwników występujących w mieszaninie). Przykładem barwienia złożonego jest barwienie metodą Grama, metodą Neissera i metodą Ziehl-Neelsena. Wśród znanych technik barwienia pojawia się również tzw. barwienie przeżyciowe, polegające na działaniu na nieutrwalony preparat żywych drobnoustrojów barwnikiem przygotowanym w dużym rozcieńczeniu, nie niszcząc tym samym komórek. Wybarwieniu ulegają komórki z uszkodzoną błoną komórkową, dzięki czemu zastosowany barwnik może swobodnie dostać się do jej wnętrza [2].
Barwienie metodą Grama
Metoda została wynaleziona w 1884 roku przez Christiana Grama. Oryginalny opis tej techniki barwienia pojawił się w tym samym roku w publikacji zatytuowanej: "The differential staining of Schizomycetes in tissue sections and in dried preparations" w Fortschitte der Medicin, Vol. 2. [6].
Gram dokonał swojego odkrycia podczas prób różnicowania komórek bakteryjnych z zakażonych tkanek. Pomimo, iż to właśnie Ch. Gram zaobserwował to, co obecnie nazywane jest „reakcją Grama”,nie dostrzegł taksonomicznej wartości tej techniki [3], [5], [6].
Metoda barwienia Grama wykorzystywana jest do różnicowania komórek nieuszkodzonych, morfologicznie podobnych bakterii na dwie grupy. Możliwe jest na podstawie oceny koloru komórki po procesie jej wybarwienia. Metoda pozwala również na wyraźne różnicowanie komórek pod względem kształtu, rozmiaru oraz szczegółów strukturalnych. W oryginalnej procedurze barwienia wykorzystywany jest nieorganiczny jod, który niestety szybko się utlenia i traci swoją skuteczność jako substancja trawiąca. Wraz z wdrożonymi modyfikacjami metody Grama, wprowadzono inny odczynnik tj. L-poliwinylopyrolidono-jod, który różni się od oryginalnego zestawu Grama tym, że jest bardziej stabilnym związkiem organicznym jodu [3], [5], [6].
Podstawy teoretyczne barwienia metodą Grama
1) Barwienie utrwalonego rozmazu za pomocą fioletu krystalicznego, zastosowanie jodu jako substancji trawiącej [3].
2) Odbarwienie pierwszego barwnika za pomocą alkoholu lub acetonu, a następnie zastosowanie barwnika kontrastowego (safraniny lub zasadowej fuksyny).
3) Kompleks fiolet krystaliczny-jod tworzy się w protoplaście (część komórki bez ściany komórkowej) wszystkich organizmów barwionych za pomocą metody Grama. Organizmy, które są zdolne zachować kompleks barwiący po odbarwieniu klasyfikowane są jako gram-dodatnie, z kolei te, które można odbarwić i zabarwić kontrastowo, zaliczane są do organizmów gram-ujemnych [3]. Kompleks fiolet krystaliczny-jod jest nierozpuszczalny w wodzie i słabo rozpuszczalny w alkoholu oraz acetonie [9].
4) Po pęknięciu (lub usunięciu) ściany komórkowej protoplast komórek gram-dodatnich i gram-ujemnych można odbarwić. Powoduje to utratę cechy gram-dodatniej. Nienaruszona ściana komórkowa działa jak bariera chroniąca przed odbarwieniem pierwszego barwnika [3].
5) Ściana komórkowa jest przepuszczalna w sposób nieselektywny. Podczas procedury barwienia metodą Grama ściana komórkowa komórek gram-dodatnich ulega odwodnieniu przez alkohol zawarty w odbarwiaczu i traci przepuszczalność, zatrzymując pierwotny barwnik. Ściana komórkowa komórek gram-ujemnych charakteryzuje się większą zawartością lipidów, przez co też staje się bardziej przepuszczalna podczas traktowania komórek alkoholem, co z kolei powoduje utratę pierwszego barwnika [3].
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.
Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).
Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.
Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:
dopasować treści stron i ich tematykę, w tym tematykę ukazujących się tam materiałów do Twoich zainteresowań,
dokonywać pomiarów, które pozwalają nam udoskonalać nasze usługi i sprawić, że będą maksymalnie odpowiadać Twoim potrzebom,
pokazywać Ci reklamy dopasowane do Twoich potrzeb i zainteresowań.
Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.
Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.
Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.
Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
Recenzje