Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Reklama
Strona główna Artykuły
Dodatkowy na dole

Dodatkowy u góry

Techniki wykorzystywane do barwienia komórek bakteryjnych

W metodzie Bactec do pożywki dodawane są kwasy tłuszczowe znakowane radioizotopem. Rosnące w pożywce prątki metabolizują dodane kwasy tłuszczowe do dwutlenku węgla zawierającego radioizotop. W przypadku obecności prątków w badanej próbce, wydzielający się nad próbką  gaz staje się radioaktywny,a wytwarzaną śladową ilość promieniowania wykrywa się czułym urządzeniem. W przypadku dodatniego wyniku hodowli możliwe jest potwierdzenie obecności prątków gruźlicy już po ok. tygodniu. Ostateczny wynik otrzymywany jest z kolei po upływie mniej więcej 6 tygodni [14].

Wiele komórek bakteryjnych łatwo wybarwia się z zastosowaniem prostych technik lub barwienia metodą Grama. Kilka typów bakterii, takich jak prątki czy gatunki Nocardia nie barwi się z użyciem tych technik lub jeśli nawet się wybarwiają generują zmienne reakcje. Jak już wspomniano prątki zawierają kwasy mykolowe, przez co w ich ścianach komórkowych obecne są duże ilości lipidów. Cecha ta uważana jest za przyczynę trudnego barwienia się komórek, do uwidocznienia których w próbkach wymagane są wyższe stężenia roztworu barwnika i/lub dłuższy czas ogrzewania. W przypadku, gdy nawet uda się wybarwić komórkę, proces jej odbarwienia (dekoloryzacja) jest jeszcze trudniejszy [12].

 

Odczynniki:

a) Roztwór barwiący: Fuksyna zasadowa: 0,3 g; etanol 95% (10 ml); fenol (kryształy roztopione pod wpływem ciepła-  5 ml); woda destylowana (95 ml)

Fuksynę należy rozpuścić w etanolu, a następnie dodać fenol rozpuszczony w wodzie. Całość roztworu wymieszać i odstawić na kilka dni (przed użyciem przefiltrować roztwór).

b) Roztwór odbarwiający: etanol 95% (97 ml) ; stężony kwas solny (3 ml)

c) Barwnik kontrastowy: błękit metylenowy (0,3 g); woda destylowana (100 ml)  [12].

 

Podłoże  Lowenstein-Jensen

Wykorzystywane jest do do hodowli Mycobacterium tuberculosis oraz innych gatunków prątków. Pierwotne, opracowane przez Lowensteina podłoże w swoim składzie zawierało czerwień Kongo i zieleń malachitową. Barwniki te wykazywały działanie częściowo hamujące wzrost innych bakterii. W podobny sposób barwniki wykorzystywane były również przez innych badaczy, w szczególności Sonnenscheina i Hohna. W Stanach Zjednoczonych popularne były podłoża, w których skład wchodził fiolet metylowy (podłoża opracowane przez Corpera i Petroffa), a także podłoże Petragnaniego (zawierające zieleń malachitową). Obecna formuła wykorzystywana w identyfikacji prątków (opracowana przez Jensena)  charakteryzuje się nieznacznie zmodyfikowaną zawartością cytrynianów i fosforanów, a także zwiększonym stężeniem zieleni malachitowej. W składzie podłoża nie ma również czerwieni Kongo. W niektórych typach podłoży dodawany jest 5% chlorek sodu, co wynika z faktu, że niektóre szczepy prątków (np. M.fortuitum, M.chelonae subsp. chelonae) wykazują tolerancję na takie stężenie NaCl. Na podłożu z NaCl wzrasta również większość szczepów szybko wzrastających, wolno rosnące bakterie M.triviale oraz niektóre szczepy M. flavescens [15].

Podłoże Lowenstein-Jensen charakteryzuje stosunkowo prosty skład, który wymaga uzupełnienia, takimi składnikami, które będą sprzyjały wzrostowi prątków. Przed zagęszczeniem do podłoża dodawana jest mieszanka glicerolu i jaj, ponieważ  substancje te są źródłem kwasów tłuszczowych i białek metabolizowanych przez prątki. W wyniku koagulacji albumin jaj podczas procesu sterylizacji otrzymywane jest stałe podłoże hodowlane. Wśród głównych składników podłoża należy wymienić: dwufosforan potasu, siarczan (VI) magnezu, cytrynian sodu, L-asparagina, glicerol, zieleń malachitową. W składzie nie można również pominąć wspomnianych jaj (będących źródłem kw. tłuszczowych i białek) oraz mąki ziemniaczanej [15].

 


Tagi: barwniki, metody barwienia, barwienie metodą Grama, preparat, odbarwianie, analiza mikroskopowa, bakterie gram-zmienne, fuksyna karbolowa, jodek heksydyny, barwienie kwasooporne, metoda Ziehl-Neelsena, pożywka Lowenstein-Jensen, Mycobacterium tuberculosis
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



lewybanner1
Informacje dnia: Fizyczny Nobel 2019 za poznanie Wszechświata i egzoplanet Badania pokazują, dlaczego płodność kobiet zmienia się z wiekiem Więcej energii to więcej efektów – w zderzeniach protonów Niektóre częste choroby i krótki sen to śmiertelne połączenie Nobel z fizjologii i medycyny Nanocząstki w zwalczaniu raka Fizyczny Nobel 2019 za poznanie Wszechświata i egzoplanet Badania pokazują, dlaczego płodność kobiet zmienia się z wiekiem Więcej energii to więcej efektów – w zderzeniach protonów Niektóre częste choroby i krótki sen to śmiertelne połączenie Nobel z fizjologii i medycyny Nanocząstki w zwalczaniu raka Fizyczny Nobel 2019 za poznanie Wszechświata i egzoplanet Badania pokazują, dlaczego płodność kobiet zmienia się z wiekiem Więcej energii to więcej efektów – w zderzeniach protonów Niektóre częste choroby i krótki sen to śmiertelne połączenie Nobel z fizjologii i medycyny Nanocząstki w zwalczaniu raka

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Job24 Obywatele Nauki NeuroSkoki Portal MaterialyInzynierskie.pl Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA Mlodym Okiem Polski Instytut Rozwoju Biznesu Analityka Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Geodezja Instytut Lotnictwa EuroLab

Szanowny Czytelniku!

 
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
 
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.

Kto będzie administratorem Twoich danych?

Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).

O jakich danych mówimy?

Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.

Dlaczego chcemy przetwarzać Twoje dane?

Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:

Komu możemy przekazać dane?

Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.

Jakie masz prawa w stosunku do Twoich danych?

Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.

Jakie są podstawy prawne przetwarzania Twoich danych?

Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.

Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
 
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
 

Newsletter

Zawsze aktualne informacje