Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Reklama4
Strona główna Artykuły
Dodatkowy na dole

Dodatkowy u góry

Techniki wykorzystywane do barwienia komórek bakteryjnych

Barwienie Grama żywych komórek

Bakterie pobrane z logarytmicznej fazy wzrostu hodowli traktuje się mieszaniną dwóch fluoryzujących barwników.  Każdy z zastosowanych barwników jest selektywny dla kwasów nukleinowych (barwnik SYTO® 9 i jodek heksydyny).

W przypadku bakterii gramdodatnich kwasy nukleinowe wybiórczo wybarwia jodek heksydyny, który skutecznie współzawodniczy z barwnikiem SYTO® 9 o miejsca wiązania. Z kolei kwasy nukleinowe bakterii gramujemnych wybarwiają się barwnikiem SYTO® 9, ponieważ tylko ten barwnik ma zdolność przenikania przez ich błonę zewnętrzną. W promieniowaniu o długości fali równej ok. λ= 480 nm, związany jodek heksydyny fluoryzuje na pomarańczowo, a SYTO® 9  na zielono [1].

 

Znane są różne teorie, wyjaśniające podział bakterii na Gram-dodatnie oraz Gram-ujemne. Teorie te obejmują różnice w cytoplazmatycznym pH. Według przeprowadzonych badań bakterie Gram-dodatnie wykazują pH=2, zaś Gram-ujemne 3, jednak pogląd ten nie został powszechnie zaakceptowany. Najbardziej prawdopobnym czynnikiem decydującym o właściwościach komórek bakterii jest grubość ściany komórkowej tych organizmów. Bakterie Gram-dodatnie mają grubszą ścianę, z kole Gram-ujemne cechuje obecność większej ilości lipidów w komórce [6].

 

Modyfikacje w metodzie barwienia Grama [6].

Od momentu wynalezienia tego typu barwienia, w metodzie wprowadzono kilka modyfikacji:

1) Modyfikacja Kopeloff i Beerman’a: pierwotny roztwór barwiący składał się z ze świeżego fioletu metylowego z węglanem sodu w wodzie destylowanej. Odbarwianie preparatu wykonywano w mieszaninie acetonu i etanolu lub samego acetonu. Fuksyna wykorzystywana była do barwienia negatywowego rozmazu. Metoda ta może być zmodyfikowana do barwienia skrawków tkanek.

2) Modyfikacja Jensen’a: metoda ta polega na zastosowaniu fioletu metylowego jako podstawowego barwnika oraz jodu i jodku potasu w wodzie jako utrwalacz. Alkohol absolutny wykorzystywany jest do odbarwiania próbki, a czerwień obojętna jako kontrast.

3) Modyfikacja Weigert’a: modyfikacja ta jest szczególnie przydatna do barwienia skrawków tkanek. Podstawowym barwnikiem jest goryczka karbolowa.

4) Modyfikacja Preston’a i Morrell’a: podstawowym barwnikiem stosowanym w tej modyfikacji jest szczawian amonu- fiolet krystaliczny. Rozmaz przemywany jest płynem Lugola, a następnie traktowany jodem. Odbarwienie przebiega z wykorzystaniem mieszaniny jod-aceton, a jako kontrast wykorzystuje się rozcieńczony roztwór  fuksyny karbolowej. Metodę zmodyfikowano tak, by zmniejszyć drażniący jod w postaci aerozolu, co wywołano poprzez zmniejszenie stężenia jodu do jednej dziesiątej i skrócenie czasu odbarwienia do 10 sekund [6]. 

 

Barwienie kwasooporne

W 1882 roku Robert Koch donosząc się do odkrycia prątków gruźlicy, opisał ich wygląd na podstawie złożonej procedury barwienia. W tym samym czasie kilku innych badaczy (Ehrlich, Ziehl, Rindfleisch i Neelsen), chcąc poprawić metody Kocha, wprowadzili zmiany do odczynników i samej procedury. Franz Ziehl jako pierwszy zastosował fenol jako utrwalacz, a Fredrich Neelsen zachował utrwalacz zaproponowany przez Ziehl’a, ale zmienił podstawowe barwienie fuksyną. Metoda ta stała się znana jako metoda Ziehl-Neelsena na początku pierwszej połowy 1890 roku.

W metodzie tej wykorzystywane jest ciepło, które ułatwia przedostawanie się barwnika w głąb woskowej ściany komórkowej trudno-barwiących się komórek. Wykorzystywanie ciepła w metodzie jest powodem dla którego określana jest ona mianem barwienia na gorąco” [12]. Metoda znalazła zastosowanie w medycynie klinicznej do potwierdzania lub wykluczania obecności prątków gruźlicy (Mycobacterium tuberculosis [12].

 

W diagnostyce gruźlicy materiał pobrany od pacjenta badany jest metodą rozmazu oraz hodowli. Materiałem do badań może być np. wycinek z oskrzeli (pobrany ze zmian uwidocznionych podczas bronchoskopii) lub próbki zgromadzone podczas zabiegu operacyjnego (fragmenty tkanki). Z racji tego, iż gruźlica może zajmować różnorodne narządy, w niektórych sytuacjach do badania można posłać praktycznie każdy materiał biologiczny pobrany od chorego (z wykluczeniem kału, który zawiera dużo innych bakterii, uniemożliwiając tym samym wiarygodną diagnostykę) [14].

 


Tagi: barwniki, metody barwienia, barwienie metodą Grama, preparat, odbarwianie, analiza mikroskopowa, bakterie gram-zmienne, fuksyna karbolowa, jodek heksydyny, barwienie kwasooporne, metoda Ziehl-Neelsena, pożywka Lowenstein-Jensen, Mycobacterium tuberculosis
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



lewybanner1
Informacje dnia: Fizyczny Nobel 2019 za poznanie Wszechświata i egzoplanet Badania pokazują, dlaczego płodność kobiet zmienia się z wiekiem Więcej energii to więcej efektów – w zderzeniach protonów Niektóre częste choroby i krótki sen to śmiertelne połączenie Nobel z fizjologii i medycyny Nanocząstki w zwalczaniu raka Fizyczny Nobel 2019 za poznanie Wszechświata i egzoplanet Badania pokazują, dlaczego płodność kobiet zmienia się z wiekiem Więcej energii to więcej efektów – w zderzeniach protonów Niektóre częste choroby i krótki sen to śmiertelne połączenie Nobel z fizjologii i medycyny Nanocząstki w zwalczaniu raka Fizyczny Nobel 2019 za poznanie Wszechświata i egzoplanet Badania pokazują, dlaczego płodność kobiet zmienia się z wiekiem Więcej energii to więcej efektów – w zderzeniach protonów Niektóre częste choroby i krótki sen to śmiertelne połączenie Nobel z fizjologii i medycyny Nanocząstki w zwalczaniu raka

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Job24 Obywatele Nauki NeuroSkoki Portal MaterialyInzynierskie.pl Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA Mlodym Okiem Polski Instytut Rozwoju Biznesu Analityka Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Geodezja Instytut Lotnictwa EuroLab

Szanowny Czytelniku!

 
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
 
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.

Kto będzie administratorem Twoich danych?

Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).

O jakich danych mówimy?

Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.

Dlaczego chcemy przetwarzać Twoje dane?

Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:

Komu możemy przekazać dane?

Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.

Jakie masz prawa w stosunku do Twoich danych?

Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.

Jakie są podstawy prawne przetwarzania Twoich danych?

Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.

Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
 
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
 

Newsletter

Zawsze aktualne informacje