Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Reklama4
Strona główna Artykuły
Dodatkowy na dole

Dodatkowy u góry

Techniki wykorzystywane do barwienia komórek bakteryjnych

 

Wykonanie:

W metodzie tej utrwalony podwyższoną temperaturą rozmaz należy zalać roztworem fuksyny karbolowej, po czym podgrzewać szkiełko podstawowe do momentu, gdy roztwór zacznie parować (nie powinien się gotować). Szkiełko należy utrzymywać w temperaturze bliskiej wrzenia przez około 5 minut, następnie schłodzić go w powietrzu, po czym spłukać pod bieżącą wodą. W kolejnym etapie przeprowadza się odbarwianie preparatu poprzez zanurzanie szkiełka podstawowego w mieszanie kwasu i alkoholu (np. 3% stężonego kwasu solnego w 90% etanolu), za każdym razem zmieniając roztwór na świeży. Po opłukaniu szkiełka wodą rozmaz należy barwić kontrastowym barwnikiem, np. zielenią malachitową,po czym  ponownie spłukuje się go wodą i suszy. Bakterie wykazujące cechę kwasooporności wybarwiają się na czerwono,a  pozostałe na kolor zielony [1],[2].




 

Zdjęcie: Etapy barwienia metodą Ziehl-Neelsena, http://www.biotechinfo.in/study-material-/acid-fast-staining-by-ziehl-neelsen-method/

Barwienie negatywowe

Metoda ta wykorzystywana jest do uwidaczniania obecności otoczek bakteryjnych.  Komórki  pobrane z hodowli bakteryjnej miesza się na szkiełku podstawowymnp. z roztworem nigrozyny naniesionym oczkiem ezy. Preparat  przykrywa sięszkiełkiem nakrywkowym i ogląda w mikroskopie z obiektywem immersyjnym (lubzwykłym) o dużym powiększeniu, np. 40-krotnym. Otoczka bakteryjna widoczna jest jako przejrzysta, jasna strefa między komórką a jej ciemnym tłem [1].

Wykonanie:

1) Na utrwalony preparat należy nanieść: roztwór fuksyny z kilkoma kroplami fuksyny zasadowej. Szkiełko ułożyć na statywie do barwienia, a następnie  podgrzać je od spodu płomieniem palnika (do momentu ukazania się pary)

2) po ostudzeniu, preparat należy spłukać wodą i osuszyć na bibule

3) na brzeg szkiełka nanieść kroplę nigrozyny lub kolargolu i rozciągnąć barwnik równomiernie po powierzchni rozmazu (wykorzystać  w tym celu krawędź drugiego szkiełka podstawowego)

4) otrzymany preparat wysuszyć w powietrzu

W wyniku barwienia komórka bakteryjna barwi się na kolor różowy,a  tło na kolor szary (nigrozyna) lub żółtobrązowy (kolargol). Otoczka komórki pozostaje bezbarwna [13].

W metodzie tej mogą być wykorzystywane różne barwniki. Najczęściej do zabarwienia komórek bakteryjnych stosuje się fuksynę z dodatkiem fuksyny karbolowej, zaś w zabarwieniu tła wykorzystywana jest np. nigrozyna lub kolargol [13].


Autor: Lidia Koperwas


Literatura:

[1]. Singleton P., 2000. Bakterie w biologii, biotechnologii i medycynie. Wydawnictwo Naukowe PWN. S.  366-368

[2]. Różalski A., 2003. Ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej. Skrypt dla studentów biologii. Wydanie III. Wydawnictwo Uniwersytetu Łódzkiego, 2003. Częśc I-teoretyczna. s. 34-39.

[3]. http://www.bd.com/resource.aspx?idx=19569

[4]. http://faculty.cbu.ca/cglogowski/2008%20BIOL101LAB2.htm

[5]. http://amrita.vlab.co.in/?sub=3&brch=73&sim=208&cnt=1

[6]. Rao S.PN., Gram’s staining. http://www.microrao.com/micronotes/pg/Gram%20stain.pdf
[7]. Acharya T., 2013. Ziehl-Neelsen technique: Principle, Procedure and reporting. Online Medical Microbiology guide. http://microbeonline.com/ziehl-neelsen-technique-principle-procedure-reporting/
[8]. http://www.biotechinfo.in/study-material-/acid-fast-staining-by-ziehl-neelsen-method/

[9].   Schlegel H.G., 2003. Mikrobiologia ogólna. Wydawnictwo Naukowe PWN, s. 71-72.

[10]. http://www.biomerieux.pl/upload/Aktualno%C5%9Bci_64_ok.pdf

[11]. Skóra J., Szponar B., Paściak M., Gutarowska B., 2013. Identyfikacja aktynobakterii środowiskowych stanowiących potencjalne zagrożenie zawodowe. Postepy Hig Med Dosw. (online), 2013; 67: 1222-1234. http://www.phmd.pl/fulltxthtml.php?ICID=1079001

[12]. Hussey M.A., Zayaitz A., 2008. Acid-Fast Stain Protocols. http://www.microbelibrary.org/component/resource/laboratory-test/2870-acid-fast-stain-protocols

[13]. http://bg.umed.lodz.pl/images/wydawnictwa/skrypty/mikrobiologia_analityka.pdf

[14]. http://pulmonologia.mp.pl/choroby/68756,gruzlica-i-mykobakteriozy

[15]. https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=22836

[16]. http://tbcindia.nic.in/pdfs/Training%20manual%20M%20tuberculosis%20C%20DST.pdf

[17]. http://textbookofbacteriology.net/tuberculosis.html



Tagi: barwniki, metody barwienia, barwienie metodą Grama, preparat, odbarwianie, analiza mikroskopowa, bakterie gram-zmienne, fuksyna karbolowa, jodek heksydyny, barwienie kwasooporne, metoda Ziehl-Neelsena, pożywka Lowenstein-Jensen, Mycobacterium tuberculosis
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



lewybanner1
Informacje dnia: Fizyczny Nobel 2019 za poznanie Wszechświata i egzoplanet Badania pokazują, dlaczego płodność kobiet zmienia się z wiekiem Więcej energii to więcej efektów – w zderzeniach protonów Niektóre częste choroby i krótki sen to śmiertelne połączenie Nobel z fizjologii i medycyny Nanocząstki w zwalczaniu raka Fizyczny Nobel 2019 za poznanie Wszechświata i egzoplanet Badania pokazują, dlaczego płodność kobiet zmienia się z wiekiem Więcej energii to więcej efektów – w zderzeniach protonów Niektóre częste choroby i krótki sen to śmiertelne połączenie Nobel z fizjologii i medycyny Nanocząstki w zwalczaniu raka Fizyczny Nobel 2019 za poznanie Wszechświata i egzoplanet Badania pokazują, dlaczego płodność kobiet zmienia się z wiekiem Więcej energii to więcej efektów – w zderzeniach protonów Niektóre częste choroby i krótki sen to śmiertelne połączenie Nobel z fizjologii i medycyny Nanocząstki w zwalczaniu raka

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Job24 Obywatele Nauki NeuroSkoki Portal MaterialyInzynierskie.pl Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA Mlodym Okiem Polski Instytut Rozwoju Biznesu Analityka Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Geodezja Instytut Lotnictwa EuroLab

Szanowny Czytelniku!

 
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
 
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.

Kto będzie administratorem Twoich danych?

Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).

O jakich danych mówimy?

Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.

Dlaczego chcemy przetwarzać Twoje dane?

Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:

Komu możemy przekazać dane?

Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.

Jakie masz prawa w stosunku do Twoich danych?

Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.

Jakie są podstawy prawne przetwarzania Twoich danych?

Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.

Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
 
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
 

Newsletter

Zawsze aktualne informacje