|
Zamknij X
|
Etapy frakcjonowania krwi:
1) W trakcie pobierania i po pobraniu krwi, próbkę należy delikatnie wymieszać przez powolne odwracanie.
2) Pobrana krew należy przenieść do probówki z tworzywa sztucznego (odpowiedniej do wirowania) za pomocą pipety z tworzywa sztucznego (o szerokiej średnicy).
3) Próbkę wirować przy 200 x g przez 20 minut w temperaturze pokojowej (przez przerw). Po zakończeniu wirowania w probówce można zaobserwować 3 różne warstwy:
- dolna warstwa: czerwone krwinki (stanowiące 50-80% całkowitej objętości)
- warstwa środkowa: bardzo cienkie pasmo białych krwinek, zwane również „kożuszkiem”.
- warstwa wierzchnia: osocze bogatopłytkowe (słomkowego koloru) [20].
Izolacja płytek krwi (wirowanie w gradiencie gęstości)
Krew żylną pobrano od zdrowych ochotników, którzy wyrazili świadomą zgodę na udział w badaniu. Krew pobrano w warunkach laboratoryjnych, metodą zapobiegającą aktywacji płytek. Pierwsze 3 ml pobranej krwi odrzucono, a do kolejnych 25 ml dodano 5 ml antykoagulantu -kwaśnego cytrynianu dekstrozy (ACD, 39 mM kwas cytrynowy-75 mM cytrynian sodu- 135 mM [D]-glukoza, pH=4,5) (metoda izolacji modyfikowana przez Birschmann’a i wsp.). Kwaśny cytrynian dekstrozy poza zapobieganiem chelatacji wapnia w krwi co zapobiega aktywacji koagulacji, dodatkowo obniża pH krwi do 6.5. Płytki krwi nie agregują łatwo w takim pH. Zazwyczaj w procedurach izolacji dodawana jest 1 część antykoagulantu na 6 części krwi (1:6) [18],[19].
Poszczególne etapy izolacji wyszczególnione są poniżej.
W ciągu 20 minut od pobrania, osocze bogate w płytki krwi (PRP) otrzymano przez wirowanie przy 200 x g przez 12 minut w temperaturze pokojowej (RT). Po wirowaniu próbkę PRP przeniesiono do probówki polipropylenowej, po czym do próbki dodano 1/10 objętości ACD oraz 100 ng/ml prostaglandyny E1 (PGE1) w celu zapobiegnięcia aktywacji płytek krwi podczas izolacji.
Następnie osocze bogatopłytkowe odwirowano (900 x g, 15 minut w temperaturze pokojowej), po czym usunięto (odessano) otrzymane osocze. Płytki krwi zawieszono w 6 ml buforu HEPES-NaCl2 (10 mM Hepes, 0.85% NaCl, pH 7.4). Próbkę naniesiono na gradient 10-17% roztworu jodiksanolu w buforze HEPES-NaCl. Gradient odwirowano przy 300 x g przez 20 minut (temperatura pokojowa) bez przerwy, a dalej zebrano frakcję płytek.
Płytki krwi wirowano przy 900 x g przez 15 minut w temperaturze pokojowej, otrzymany osad przemyto (1x) i ponownie zawieszono w wolnym od Ca2+ buforze Tyroda-HEPES (137 mM NaCl- 0,3 mM NaH2PO4-3,5 mM Hepes-5,5 mM [D]-glukoza, pH 7,35). Na koniec określono stężenie płytek [18],[19].
LITERATURA:
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.
Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).
Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.
Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:
dopasować treści stron i ich tematykę, w tym tematykę ukazujących się tam materiałów do Twoich zainteresowań,
dokonywać pomiarów, które pozwalają nam udoskonalać nasze usługi i sprawić, że będą maksymalnie odpowiadać Twoim potrzebom,
pokazywać Ci reklamy dopasowane do Twoich potrzeb i zainteresowań.
Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.
Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.
Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.
Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
Recenzje