Laboratoria.net
|
Zamknij X
|
2) Barwienie powierzchniowe (przeciwciała sprzężone z barwnikami fluorescencyjnymi): przeprowadzane jest bezpośrednio po uzyskaniu zawiesiny materiału, który poddaje się inkubacji z przeciwciałem monoklonalnym bądź też z wieloma przeciwciałami, które sprzężone są z różnymi fluorochromami. Wymagane jest by barwienie przeprowadzać w ciemności i w temperaturze pokojowej. Wybarwione komórki poddawane są działaniu buforu, którego zadaniem jest utrwalenie barwienia. Bufor ten dodatkowo powoduje lizę erytrocytów, co jest niezbędne do analizy próbek z krwi i szpiku kostnego. W zależności od zastosowanej mody barwienia, po etapie lizy może pojawić się etap przepłukania komórek buforem (najczęściej zawierającym PBS), co ma na celu usunięcie niezwiązanych przeciwciał i resztek roztworu lizującego [17].
3) Barwienie wewnątrzkomórkowe z wykorzystaniem przeciwciał: w barwieniu antygenów wewnątrzkomórkowych (cytoplazmatycznych i jądrowych) wymagane jest wcześniejsze utrwalenie komórek. Utrwalanie zazwyczaj wykonywane jest poprzez inkubację w roztworze z formaldehydem. Następnie po utrwaleniu, komórki zostają poddane permeabilizacji łagodnym detergentem. W wyniku tego procesu dochodzi do częściowej dezintegracji błony komórkowej, która staje się przepuszczalna dla cząstek określonych rozmiarów. Równocześnie z działaniem środka permeabilizującego, komórki poddaje się inkubacji z przeciwciałem monoklonalnym skierowanym przeciwko wewnątrzkomórkowemu antygenowi. Właściwie dobrany środek permeabilizujący pozwala na przejście do wnętrza komórki dużych cząsteczek np. przeciwciał klasy IgM. Roztwór utrwalający, permeabilizujący oraz niezwiązane przeciwciała należy opłukać z wykorzystaniem roztworu PBS [17].
Autor: Zuzanna Koperwas
Literatura:
[1]. Gołąb J., Nowoczesna diagnostyka medyczna i biosensory w medycynie. http://info.ifpan.edu.pl/nanobiom/ichf/JG2.pdf
[2]. Powroźnik B., Kubowicz P., Pękala E., 2012. Monoclonal antibodies in targeted therapy.
Postepy Hig Med Dosw (online), 2012; 66: 663-673.
[3]. Chames P., Baty D., 2009. Bispecific antibodies for cancer therapy. Journal List, MAbs, v.1(6); Nov-Dec 2009. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2791310/
[4]. Szwed M., Marczak A., Rogalska A., Matusiak A., Jóźwiak Z., 2010. Rola przeciwciał monoklonalnych w transporcie leków do komórek nowotworowych. Nowotwory Journal of Oncology 2010, volume 60, Number 5, 442-450.
[5]. Greenfield E.A., 2014. Generating monoclonal Antibodies. http://www.cshlpress.com/pdf/sample/2013/Antibodies2/AB2Intro7Part1.pdf
[6]. http://www.microrao.com/micronotes/mcab.pdf
[7]. Jakóbisiak M., Przeciwciała monoklonalne, Immunologia, red. Gołąb J., Jakóbisiak M., Lasek W., wydaw. PWN, 2005, s. 45-53.
[8].http://biotechnologia.pl/farmacja/artykuly/przeciwciala-nowoczesne-narzedzia-wspolczesnej-medycyny,11014
[9]. Ansar W., Ghosh S., 2013. Monoclonal Antibodies: A Tool in Clinical Research,
Indian Journal of Clinical Medicine 2013:4 9–21.
[10]. Zieliński M., Płuciemmiczak A., 2009. Przeciwciała monoklonalne- zastosowanie w medycynie. Biotechnologia 2 (85), 113-122, 2009. http://www.pfb.info.pl/files/kwartalnik/2_2009/08.%20Zielinski.pdf
[11]. Pandey S., 2010. HYBRIDOMA TECHNOLOGY FOR PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODIES. Volume 1, Issue 2, March –April 2010; Article 017. http://www.globalresearchonline.net/volume1issue2/Article%20017.pdf
[12]. Jaszczołt M., Boczkaj G., Grygoryshyn K., Kamiński M., 2011. Immunochromatografia: przegląd i charakterystyka immunosorbentów oraz metod immobilizacji. CAMERA SEPARATORIA previously POSTĘPY CHROMATOGRAFII , Volume 3, Number 1 / June 2011, 69-85. http://dach.ich.uph.edu.pl/cs/download/cs_vol3_no1/_cs_2011_69-85.pdf
[13]. Sosińska-Mielcarek K., Jassem J., 2005. Przeciwciała monoklonalne w leczeniu nowotworów litych. Onkologia w praktyce klinicznej, tom1, nr 4. https://journals.viamedica.pl/oncology_in_clinical_practice/article/viewFile/9396/8012
[14]. http://www.cancer.org/acs/groups/cid/documents/webcontent/003013-pdf.pdf
[15]. Gołąb J., Nowoczesna diagnostyka medyczna oraz biosensory w medycynie. http://info.ifpan.edu.pl/nanobiom/ichf/JG2.pdf
[16]. Cichoń D., Podstawy immunochemii i przykłady jej zastosowania w diagnostyce medycznej, http://bioinfo.mol.uj.edu.pl/articles/Cichon03
[17]. Sędek Ł., Mazur B., 2008. Przeciwciała monoklonalne i poliklonalne i ich zastosowanie w cytometrii przepływowej. Postępy Biologii Komórki, Tom 35, 2008, Suplement Nr 24 (17-34). http://www.pbkom.eu/sites/default/files/artykulydo2012/35_s24_17.pdf
[18]. Rosiński M., Piasecka-Kwiatkowska D., Warchalewski J.R., 2005. Przegląd metod separacji i oczyszczania białek przydatnych w badaniach i analizie żywności. ŻYWNOŚĆ. Nauka.Technologia.Jakość, 2005, 3 (44), 5-22. http://www.pttz.org/zyw/wyd/czas/2005,%203%2844%29/01_Rosinski.pdf
[19].http://www.ptglab.com/Support/TechnicalSupport/LearningCenter/AntibodyProductionAndPurification.aspx
[20]. http://neobiolab.com/research/monoclonal-versus-polyclonal-antibodies
[21]. Leenaars M., Hendriksen C.F.M., 2005. Critical Steps in the Production of Polyclonal and Monoclonal Antibodies: Evaluation and Recommendations. ILAR Journal, Volume 46, Issue 3 Pp. 269-279. http://ilarjournal.oxfordjournals.org/content/46/3/269.full
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.
Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).
Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.
Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:
dopasować treści stron i ich tematykę, w tym tematykę ukazujących się tam materiałów do Twoich zainteresowań,
dokonywać pomiarów, które pozwalają nam udoskonalać nasze usługi i sprawić, że będą maksymalnie odpowiadać Twoim potrzebom,
pokazywać Ci reklamy dopasowane do Twoich potrzeb i zainteresowań.
Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.
Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.
Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.
Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
Recenzje