|
Zamknij X
|
Oznaczania cystatyny C za pomocą gotowego zestawu odczynników
Zasada testu:
Specjalnie zaprojektowany zestaw odczynników pozwala na pomiar stężenia ludzkiej cystatyny C z wykorzystaniem testu ELISA. Płytka powleczona jest przeciwciałami monoklonalnymi skierowanymi przeciwko cystatynie C (przeciwciała anty-cystatyna C). Próbka badana mieszana jest z wyznakowanymi biotyną przeciwciałami anty-cystatyna C oraz streptawidyną- HRP. Streptawidyna ulega silnemu wiązaniu z biotyną [15].
Próbka zmieszana z przeciwciałem, biotyną, strepawidyną-HRP nanoszona jest na płytkę, którą następnie inkubuje się przez 60 minut w temp. 37⁰C. Przeciwciała niezwiązane ze znacznikiem – biotyną odmywa się, a na płytkę nanosi się kolorowy reagent, który zmienia kolor roztworu na niebieski. Niebieski roztwór zmienia się w żółty po dodaniu roztworu zatrzymującego reakcję. Następnie w próbce mierzona jest absorbancja przy 450 nm, odpowiadająca stężeniu ludzkiej cystatyny C [15].
Przygotowanie próbek:
1) Surowica: pozostawić pobraną próbkę na ok. 10-20 min. w temperaturze pokojowej w celu skrzepnięcia, a następnie ją odwirować (przy 2000 – 3000 obr./min. przez 20 minut). Ostrożnie zebrać otrzymany po wirowaniu supernatant. Jeżeli nadal w próbce znajdują się nieodwirowane cząsteczki, należy powtórzyć wirowanie i ponownie zebrać supernatant do oznaczeń. Znaczne rozcieńczenie próbki (np. 200 – 1000x) mogą być niezbędne dla utrzymania swoistości testu [15].
2) Osocze krwi: zgodnie z wymaganiami zbioru próbek, jako antykoagulant może być stosowany EDTA lub cytrynian sodu. Do próbki należy dodać EDTA lub cytrynian i mieszać przez 10-20 minut. Następnie próbkę należy odwirować przy 2000-3000 obr./min. Ostrożnie zebrać otrzymany supernatant. W przypadku dalszej obecności nieodwirowanych cząsteczek postępować jak wyżej [15].
3) Próbka moczu: próbkę pobrać do sterylnej probówki, a następnie odwirować (2000-3000 obr./min. przez 20 min.) Zebrać supernatant, a w razie potrzeby próbkę odpowiednio rozcieńczyć [15].
4) Próbki tkanek: należy zastosować odpowiedni protokół homogenizacji z niedenaturującym buforem, aby uwolnić z tkanek składniki białkowe. Do próbki należy dodać inhibitory proteaz i utrzymywać ją w niskiej temperaturze podczas kolejnych etapów homogenizacji. Próbkę odwirować w celu usunięcia pozostałości tkanek, a w otrzymanym supernatancie należy oznaczać stężenie cystatyny C [15].
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.
Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).
Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.
Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:
dopasować treści stron i ich tematykę, w tym tematykę ukazujących się tam materiałów do Twoich zainteresowań,
dokonywać pomiarów, które pozwalają nam udoskonalać nasze usługi i sprawić, że będą maksymalnie odpowiadać Twoim potrzebom,
pokazywać Ci reklamy dopasowane do Twoich potrzeb i zainteresowań.
Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.
Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.
Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.
Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
Recenzje