Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Labro glowna
Strona główna › Artykuły
Artykuły

Firmy i laboratoria w Polsce
Katalog firm i laboratoriów Dodaj firmę
Katalog produktów i usług
Dodaj produkt Katalog produktów
Dodatkowy u góry
Labro na dole

Białko cystatyny C jako marker filtracji kłębuszkowej

Przygotowanie próbek:

 

Próba ślepa (blank), standard, próba badana: należy je przygotować na osobnej 96-dołkowej płytce do testu ELISA, a następnie równocześnie przenieść na płytkę, na której wykonywane będzie oznaczenie.

 

Procedura badania:

  1. Przygotowanie standardowych rozcieńczeń próbek (wg poniższej tabeli):


  1. Przygotowanie studzeniek z próbą ślepą (blankiem): do studzienek dodać jedynie roztwory chromogenu A i B, a następnie zatrzymać reakcje podczas standardowych etapów procedury
  2. Przygotowanie studzienek ze standardem: dodać 50 µl standardu i 50µl streptawidyny-HRP (przeciwciała znakowane biotyną zostały dodane wczesniej do standardu)
  3. Przygotowanie studzienek z próbką badaną: 10 µl próbki rozcieńczyć 30 µl roztworu do rozcieńczeń (1% BSAw PBS, pH=7,4), następnie dodać 10 µl przeciwciał wyznakowanych biotyną anty-cystatyna C oraz 50µl strepawidyną-HRP. Próbkę dokładnie wymieszać, nie wirować.
  4. Wszystkie otrzymane roztwory przenieść na płytkę ELISA. Płytkę umieścić w foliowej torebce, delikatnie mieszać przez 60 minut w 37⁰C.
  5. Przygotować roztwór do przemywania: 30x stężony roztwór do przemywania należy doprowadzić do stężenai 1x za pomocą wody. Przygotować 600 µl 1x roztworu na każdą studzienkę.  
  6. Przemywanie płytki: delikatnie usnąć membranę (folię) zabezpieczającą płytke przed wysychaniem oraz zanieczyszczeniem. Ze studzienek usunąć płyn, a następnie do każdej z nich dodać 100 µl roztworu do płukania. Usunąć płyn po 30 sekundach. Następnie powtórzyć procedurę przemywania jeszcze 5 razy. Osuszyć płytkę.
  7. Utrwalanie koloru: do każdej studzienki dodać 50 µl chromogenu A, a następnie 50 µl chromogenu B. Delikatnie wymieszać roztwory A i B, inkubować płytke (chroniąc ją przed światłem) przez 10 minut w 37⁰C.
  8. Zatrzymywanie reakcji: do każdej studzienki dodać 50 µl roztworu Stop I (w wyniku zatrzymania reakcji zachodzi zmiana koloru roztworu z niebieskiego na żółty).
  9. Odczytanie wyników: w przeciągu 10 minut od dodania do próbek roztworu stopującego reakcję należy wykonać pomiar absorbancji przydługości fali równej 450 nm. Studzienka z próbką ślepą (blank) stanowi pomiar zerowy, absorbancję (OD) należy zmierzyć dla każdego dołka płytki [15]. 

 

Analiza danych: w tym celu należy sporządzić krzywą wzorcową, z której odczytuje się wyniki stężeń.


Zdj. Uproszczony schemat powyższej procedury oznaczanai stężenia ludzkiej cystatyny C (ELISA Kit), [15].

 


Tagi: cystatyna C, Cys-C, ocena funkcji nerek, inhibitory proteinaz cysteinowych, marker wydolności nerek
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



Informacje dnia: W Polsce żyje miasto ludzi uratowanych dzięki przeszczepom szpiku Popularny lek na tarczycę może mieć związek z zanikiem kości W ostatnich 60 latach światowa produkcja żywności stale rosła Sztuczna inteligencja niesie zagrożenia dla rynku pracy Program naprawczy dla NCBR IChF PAN z grantem KE W Polsce żyje miasto ludzi uratowanych dzięki przeszczepom szpiku Popularny lek na tarczycę może mieć związek z zanikiem kości W ostatnich 60 latach światowa produkcja żywności stale rosła Sztuczna inteligencja niesie zagrożenia dla rynku pracy Program naprawczy dla NCBR IChF PAN z grantem KE W Polsce żyje miasto ludzi uratowanych dzięki przeszczepom szpiku Popularny lek na tarczycę może mieć związek z zanikiem kości W ostatnich 60 latach światowa produkcja żywności stale rosła Sztuczna inteligencja niesie zagrożenia dla rynku pracy Program naprawczy dla NCBR IChF PAN z grantem KE

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Job24 Obywatele Nauki NeuroSkoki Portal MaterialyInzynierskie.pl Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA Mlodym Okiem Polski Instytut Rozwoju Biznesu Analityka Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Bioszkolenia Geodezja Instytut Lotnictwa EuroLab

Szanowny Czytelniku!

 
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
 
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.

Kto będzie administratorem Twoich danych?

Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).

O jakich danych mówimy?

Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.

Dlaczego chcemy przetwarzać Twoje dane?

Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:

Komu możemy przekazać dane?

Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.

Jakie masz prawa w stosunku do Twoich danych?

Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.

Jakie są podstawy prawne przetwarzania Twoich danych?

Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.

Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
 
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
 

Newsletter

Zawsze aktualne informacje